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质谱定量卵白质组学-iTRAQ

 

 

概述

 

    卵白质组学(Proteomics)表现“一种基因组所表达的全套卵白质”,即包罗一种细胞以致一种生物所表达的所有卵白质。卵白质组学是一门以片面的卵白质性子研讨为底子,在卵白质程度对疾病机理、细胞形式、功效联系等方面举行探究的迷信。
      iTRAQ技能(isobaric tags for relative and absolute quantitation)是比年因由美国使用生物体系公司ABI研发的一种新的卵白质组学定量研讨技能。该技能接纳4种或8种同位素编码的标签,经过特异性标志多肽的氨基基团,之落伍行串联质谱剖析,可同时比力4种或8种差别样品中卵白质的绝对含量或相对含量。

 


技能特点

 

 可同时标志2~8个样本

 标志完全,标志服从高达 97%以上

 较高的反复性,能简化谱的庞大水平、进步离子强度

 iTRAQ技能不但可发明胞浆卵白,另有膜卵白、核卵白、胞外卵白。iTRAQ技能可检测出低品貌卵白、强碱性卵白、小于10KD或大于200KD的卵白

 可标志修饰后的氨基酸,因而对磷酸化卵白等翻译后修饰卵白举行定性定量研讨

 陈诉离子的绝对分子质量较低(113~121),低分子量区是质谱定性(质量确定)和定量(品貌比力)较为正确的地区,因而质谱检测更为敏捷牢靠

 


技能流程

 

 样本颠末差别处置后提取卵白质

 卵白质颠末复原,关闭后胰卵白酶酶切

 肽段混淆物辨别用差别的iTRAQ试剂标志

 等量混淆种种iTRAQ试剂标志的肽段

 MS/MS质谱检测及剖析

 


技能使用

 

 同时标志 8 个样品,一次实行完成多达 8 个样品的卵白质判定和定量

 可以举行多个工夫点卵白质组静态变革的监测

 可以剖析细致分期/型的临床疾病样本,并可设计样本反复

 细胞周期、细胞信号传导整个历程的卵白质组静态学研讨